nature.comን ስለጎበኙ እናመሰግናለን። የሚጠቀሙበት የአሳሽ ስሪት የተወሰነ የCSS ድጋፍ አለው። ለተሻለ ተሞክሮ፣ የቅርብ ጊዜውን የአሳሽ ስሪት (ወይም በኢንተርኔት ኤክስፕሎረር ውስጥ የተኳሃኝነት ሁነታን ማጥፋት) እንዲጠቀሙ እንመክራለን። በተጨማሪም፣ ቀጣይነት ያለው ድጋፍ ለማረጋገጥ፣ ይህ ጣቢያ ቅጦችን ወይም ጃቫስክሪፕትን አያካትትም።
ሜላሚን በአጋጣሚም ሆነ ሆን ተብሎ በተወሰኑ የምግብ ምድቦች ውስጥ ሊኖር የሚችል የታወቀ የምግብ ብክለት ነው። የዚህ ጥናት ዓላማ በሕፃን ፎርሙላ እና በወተት ዱቄት ውስጥ ሜላሚንን መለየት እና መጠን ማረጋገጥ ነበር። ከኢራን የተለያዩ ክልሎች የተውጣጡ 40 በገበያ ላይ የሚገኙ የምግብ ናሙናዎች፣ የሕፃን ፎርሙላ እና የወተት ዱቄትን ጨምሮ፣ ተተነተኑ። የናሙናዎቹ ግምታዊ የሜላሚን ይዘት ከፍተኛ አፈጻጸም ባለው ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ-አልትራቫዮሌት (HPLC-UV) ስርዓት በመጠቀም ተወስኗል። ሜላሚንን በ0.1–1.2 μg mL−1 ክልል ውስጥ ለመለየት የካሊብሬሽን ኩርባ (R2 = 0.9925) ተገንብቷል። የመለኪያ እና የመለየት ገደቦች በቅደም ተከተል 1 μg mL−1 እና 3 μg mL−1 ነበሩ። ሜላሚን በሕፃን ፎርሙላ እና በወተት ዱቄት ውስጥ ተፈትኗል፣ ውጤቶቹም በሕፃን ፎርሙላ እና በወተት ዱቄት ናሙናዎች ውስጥ የሜላሚን መጠን በቅደም ተከተል 0.001–0.095 mg kg−1 እና 0.001–0.004 mg kg−1 መሆኑን አሳይተዋል። እነዚህ እሴቶች ከአውሮፓ ህብረት ህግ እና ከኮዴክስ አልሜነታሪየስ ጋር የሚጣጣሙ ናቸው። የእነዚህ የወተት ተዋጽኦዎች የሜላሚን ይዘት መቀነስ ለሸማቾች ጤና ከፍተኛ አደጋ እንደማያስከትል ልብ ማለት ያስፈልጋል። ይህ በአደጋ ግምገማው ውጤትም የተደገፈ ነው።
ሜላሚን ከሲያናሚድ የተገኘ ሞለኪውላዊ ፎርሙላ C3H6N6 ያለው ኦርጋኒክ ውህድ ነው። በውሃ ውስጥ በጣም ዝቅተኛ የመሟሟት አቅም ያለው ሲሆን በግምት 66% ናይትሮጅን ነው። ሜላሚን በስፋት ጥቅም ላይ የሚውል የኢንዱስትሪ ውህድ ሲሆን ፕላስቲኮችን፣ ማዳበሪያዎችን እና የምግብ ማቀነባበሪያ መሳሪያዎችን (የምግብ ማሸጊያዎችን እና የወጥ ቤት እቃዎችን ጨምሮ) ለማምረት ሰፊ ህጋዊ አጠቃቀሞች አሉት1,2። ሜላሚን ለበሽታዎች ህክምና እንደ መድኃኒት ተሸካሚም ያገለግላል። በሜላሚን ውስጥ ያለው ከፍተኛ የናይትሮጅን መጠን ውህዱን አላግባብ መጠቀም እና የፕሮቲን ሞለኪውሎችን ባህሪያት ለምግብ ንጥረ ነገሮች ሊያስተላልፍ ይችላል3,4። ስለዚህ ሜላሚንን በምግብ ምርቶች ውስጥ መጨመር የወተት ተዋጽኦዎችን ጨምሮ የናይትሮጅን ይዘት ይጨምራል። ስለዚህ የወተት ፕሮቲን ይዘት ከእውነታው በላይ እንደሆነ በስህተት ደመደመ።
ለእያንዳንዱ ግራም ሜላሚን ሲጨመር የምግብ ፕሮቲን ይዘት በ0.4% ይጨምራል። ሆኖም ሜላሚን በውሃ ውስጥ በጣም የሚሟሟ እና የበለጠ ከባድ ጉዳት ሊያስከትል ይችላል። እንደ ወተት ባሉ ፈሳሽ ምርቶች ላይ 1.3 ግራም ሜላሚን መጨመር የወተት ፕሮቲን ይዘት በ30% 5,6 ሊጨምር ይችላል። ሜላሚን የፕሮቲን ይዘትን ለመጨመር በእንስሳት እና በሰው ምግብ ላይ ቢጨመርም7፣ የኮዴክስ አልሜናሪየስ ኮሚሽን (CAC) እና ብሔራዊ ባለስልጣናት ሜላሚንን እንደ የምግብ ተጨማሪ ነገር አላፀደቁም እና በቆዳ ውስጥ ከተዋጠ፣ ከተነፈሰ ወይም ከተዋጠ አደገኛ እንደሆነ ዘርዝረዋል። እ.ኤ.አ. በ2012 የዓለም ጤና ድርጅት (WHO) ዓለም አቀፍ የካንሰር ምርምር ኤጀንሲ ሜላሚንን እንደ ክፍል 2ቢ ካርሲኖጅን ዘርዝሯል ምክንያቱም ለሰው ልጅ ጤና ጎጂ ሊሆን ይችላል8። ለረጅም ጊዜ ለሜላሚን መጋለጥ ካንሰር ወይም የኩላሊት ጉዳት ሊያስከትል ይችላል2። በምግብ ውስጥ ያለው ሜላሚን ከሲያኑሪክ አሲድ ጋር በመዋሃድ በኩላሊት እና በፊኛ ሕብረ ሕዋሳት ላይ ጉዳት እንዲሁም በሽንት ቱቦ ካንሰር እና ክብደት መቀነስ ላይ ጉዳት ሊያስከትሉ የሚችሉ ውሃ የማይሟሟ ቢጫ ክሪስታሎችን ይፈጥራል9,10። አጣዳፊ የምግብ መመረዝ እና በተለይም በጨቅላ ሕፃናት እና ትንንሽ ልጆች ላይ ሞት ሊያስከትል ይችላል።11 የዓለም የጤና ድርጅት (WHO) በቀን 0.2 ሚ.ግ/ኪ.ግ የሰውነት ክብደት ለሰው ልጆች የሚፈቀደውን ሜላሚን መጠን (TDI) በCAC መመሪያዎች መሠረት አስቀምጧል።12 የአሜሪካ የምግብ እና የመድኃኒት አስተዳደር (US FDA) ለሜላሚን ከፍተኛውን የተረፈ መጠን በጨቅላ ሕፃናት ፎርሙላ ውስጥ 1 ሚ.ግ/ኪ.ግ እና በሌሎች ምግቦች ውስጥ 2.5 ሚ.ግ/ኪ.ግ አስቀምጧል።2,7 በመስከረም 2008፣ በርካታ የሀገር ውስጥ የሕፃናት ፎርሙላ አምራቾች የምርቶቻቸውን የፕሮቲን ይዘት ለመጨመር ሜላሚንን በወተት ዱቄት ውስጥ እንደጨመሩ ሪፖርት ተደርጓል፣ ይህም የወተት ዱቄት መመረዝ እና ከ294,000 በላይ ሕፃናትን ያመመ እና ከ50,000 በላይ ሕፃናትን ሆስፒታል የገባበት አገር አቀፍ የሜላሚን መመረዝ ክስተት እንዲፈጠር አድርጓል።13
ጡት ማጥባት ሁልጊዜ የሚቻል አይደለም፤ ለምሳሌ የከተማ ኑሮ ችግሮች፣ የእናት ወይም የልጅ ሕመም፣ ይህም ሕፃናትን ለመመገብ የሕፃን ቀመር መጠቀምን ያስከትላል። በዚህም ምክንያት፣ በስብስብ ውስጥ ከጡት ወተት ጋር በተቻለ መጠን ቅርብ የሆነ የሕፃን ቀመር ለማምረት ፋብሪካዎች ተቋቁመዋል14. በገበያ ላይ የሚሸጠው የሕፃን ቀመር ብዙውን ጊዜ ከከብት ወተት የሚዘጋጅ ሲሆን ብዙውን ጊዜ በልዩ ስብ፣ ፕሮቲን፣ ካርቦሃይድሬት፣ ቫይታሚኖች፣ ማዕድናት እና ሌሎች ውህዶች የተሰራ ነው። ከጡት ወተት ጋር ለመቅረብ፣ የቀመሩ ፕሮቲን እና የስብ ይዘት ይለያያል፣ እና እንደ የወተት አይነት፣ እንደ ብረት ባሉ ቫይታሚኖች እና ማዕድናት የተጠናከሩ ናቸው። ህፃናት ስሜታዊ ቡድን ስለሆኑ እና የመመረዝ አደጋ ስላለ፣ የወተት ዱቄት አጠቃቀም ደህንነት ለጤና በጣም አስፈላጊ ነው። በቻይና ሕፃናት መካከል የሜላሚን መመረዝ ጉዳይ ከተከሰተ በኋላ፣ በዓለም ዙሪያ ያሉ አገሮች ለዚህ ጉዳይ ትኩረት ሰጥተዋል፣ እናም የዚህ አካባቢ ስሜታዊነትም ጨምሯል። ስለዚህ፣ የሕፃናትን ጤና ለመጠበቅ የሕፃናትን የፎርሙላ ምርት ቁጥጥርን ማጠናከር በተለይ አስፈላጊ ነው። ሜላሚን በምግብ ውስጥ ለመለየት የተለያዩ ዘዴዎች አሉ፤ ከእነዚህም ውስጥ ከፍተኛ አፈፃፀም ያለው ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ (HPLC)፣ ኤሌክትሮፎረሲስ፣ የስሜት ህዋሳት ዘዴ፣ ስፔክትሮፎቶሜትሪ እና አንቲጂን-አንቲቦዲ ኢንዛይም-ሊንክድ ኢሚውኖሶርበንት ምርመራ16 ይገኙበታል። እ.ኤ.አ. በ2007 የአሜሪካ የምግብ እና የመድኃኒት አስተዳደር (ኤፍዲኤ) ሜላሚን እና ሲያኑሪክ አሲድ በምግብ ውስጥ ለመወሰን የHPLC ዘዴ አዘጋጅቶ አሳትሟል፣ ይህም የሜላሚን ይዘት ለመወሰን በጣም ውጤታማው ዘዴ ነው17።
አዲስ የኢንፍራሬድ ስፔክትሮስኮፒ ቴክኒክን በመጠቀም በተለካው የሕፃናት ፎርሙላ ውስጥ የሜላሚን ክምችት ከ0.33 እስከ 0.96 ሚሊግራም በኪሎግራም (mg kg-1) ይደርሳል። 18 በስሪላንካ የተደረገ አንድ ጥናት በሙሉ የወተት ዱቄት ውስጥ ያለው የሜላሚን መጠን ከ0.39 እስከ 0.84 ሚ.ግ ኪ.ግ-1 ይደርሳል። በተጨማሪም፣ ከውጭ የገቡ የሕፃናት ፎርሙላ ናሙናዎች በቅደም ተከተል ከፍተኛውን የሜላሚን መጠን ይይዛሉ፣ በቅደም ተከተል 0.96 እና 0.94 ሚ.ግ/ኪ.ግ። እነዚህ ደረጃዎች ከቁጥጥር ገደቡ (1 ሚ.ግ/ኪ.ግ) በታች ናቸው፣ ነገር ግን ለሸማቾች ደህንነት የክትትል ፕሮግራም ያስፈልጋል። 19
በርካታ ጥናቶች በኢራን የሕፃናት ፎርሙላዎች ውስጥ ያለውን የሜላሚን መጠን መርምረዋል። ​​ከናሙናዎቹ ውስጥ 65% የሚሆኑት ሜላሚን የያዙ ሲሆን በአማካይ 0.73 ሚ.ግ./ኪ.ግ እና ቢበዛ 3.63 ሚ.ግ./ኪ.ግ. ናቸው። ሌላ ጥናት እንዳመለከተው በሕፃናት ፎርሙላ ውስጥ ያለው የሜላሚን መጠን ከ0.35 እስከ 3.40 μg/ኪ.ግ. እና በአማካይ 1.38 μg/ኪ.ግ. ነው። በአጠቃላይ፣ በኢራን የሕፃናት ፎርሙላዎች ውስጥ የሜላሚን መኖር እና ደረጃ በተለያዩ ጥናቶች ተገምግሟል፣ ሜላሚን የያዙ አንዳንድ ናሙናዎች በተቆጣጣሪ ባለሥልጣናት ከተቀመጠው ከፍተኛ ገደብ (2.5 ሚ.ግ./ኪ.ግ.) አልፈዋል።
በምግብ ኢንዱስትሪ ውስጥ ያለውን ከፍተኛ የወተት ዱቄት ቀጥተኛ እና ቀጥተኛ ያልሆነ ፍጆታ እና የሕፃናት ፎርሙላ ህጻናትን በመመገብ ረገድ ያለውን ልዩ ጠቀሜታ ከግምት ውስጥ በማስገባት፣ ይህ ጥናት በወተት ዱቄት እና በሕፃናት ፎርሙላ ውስጥ የሜላሚንን የመለየት ዘዴ ለማረጋገጥ ያለመ ነው። እንደ እውነቱ ከሆነ፣ የዚህ ጥናት የመጀመሪያ ዓላማ ከፍተኛ አፈጻጸም ያለው ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ (HPLC) እና አልትራቫዮሌት (UV) ምርመራን በመጠቀም በሕፃን ፎርሙላ እና በወተት ዱቄት ውስጥ የሜላሚን ብክነት ለመለየት ፈጣን፣ ቀላል እና ትክክለኛ የቁጥር ዘዴ ማዘጋጀት ነበር፤ በሁለተኛ ደረጃ፣ የዚህ ጥናት ዓላማ በኢራን ገበያ በሚሸጠው የሕፃናት ፎርሙላ እና የወተት ዱቄት ውስጥ ያለውን የሜላሚን ይዘት መወሰን ነበር።
ለሜላሚን ትንተና የሚያገለግሉ መሳሪያዎች እንደ የምግብ ማምረቻ ቦታ ይለያያሉ። በወተት እና በሕፃን ፎርሙላ ውስጥ የሜላሚን ቅሪቶችን ለመለካት ስሜታዊ እና አስተማማኝ የHPLC-UV ትንተና ዘዴ ጥቅም ላይ ውሏል። የወተት ተዋጽኦዎች የሜላሚን መለኪያን ሊያስተጓጉሉ የሚችሉ የተለያዩ ፕሮቲኖችን እና ቅባቶችን ይይዛሉ። ስለዚህ፣ በሰን እና ሌሎች 22 እንደተገለጸው፣ ከመሳሪያ ትንተና በፊት ተገቢ እና ውጤታማ የጽዳት ስትራቴጂ ያስፈልጋል። በዚህ ጥናት፣ የሚጣሉ የሲሪንጅ ማጣሪያዎችን ተጠቅመናል። በዚህ ጥናት፣ በሕፃን ፎርሙላ እና በወተት ዱቄት ውስጥ ሜላሚንን ለመለየት የC18 አምድ ተጠቅመናል። ምስል 1 ለሜላሚን ለይቶ ለማወቅ ክሮማቶግራምን ያሳያል። በተጨማሪም፣ ከ0.1–1.2 mg/kg ሜላሚን የያዙ ናሙናዎች መልሶ ማግኘት ከ95% እስከ 109%፣ የሪግሬሽን እኩልታው y = 1.2487x − 0.005 (r = 0.9925) ነበር፣ እና አንጻራዊ መደበኛ መዛባት (RSD) እሴቶች ከ0.8 እስከ 2% ይደርሳሉ። የሚገኘው መረጃ ዘዴው በጥናቱ የማጎሪያ ክልል ውስጥ አስተማማኝ መሆኑን ያሳያል (ሠንጠረዥ 1)። የሜላሚን የመለኪያ መሣሪያ ገደብ (LOD) እና የመለኪያ ገደብ (LOQ) በቅደም ተከተል 1 μg mL−1 እና 3 μg mL−1 ነበሩ። በተጨማሪም የሜላሚን የአልትራቫዮሌት ስፔክትረም በ242 nm የመምጠጥ ባንድ አሳይቷል። የምርመራ ዘዴው ስሜታዊ፣ አስተማማኝ እና ትክክለኛ ነው። ይህ ዘዴ የሜላሚን ደረጃን መደበኛ በሆነ መንገድ ለመወሰን ሊያገለግል ይችላል።
ተመሳሳይ ውጤቶች በበርካታ ደራሲዎች ታትመዋል። በወተት ተዋጽኦዎች ውስጥ ሜላሚንን ለመተንተን ከፍተኛ አፈጻጸም ያለው ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ-ፎቶዲዮድ አደራደር (HPLC) ዘዴ ተዘጋጅቷል። ዝቅተኛው የመለኪያ ገደብ ለወተት ዱቄት 340 μg ኪ.ግ−1 እና ለጨቅላ ፎርሙላ 280 μg ኪ.ግ−1 ነበር። ፊላዚ እና ሌሎች (2012) ሜላሚን በጨቅላ ፎርሙላ በHPLC አልተገኘም ሲሉ ሪፖርት አድርገዋል። ሆኖም ግን፣ 8% የሚሆኑት የወተት ዱቄት ናሙናዎች በ0.505–0.86 mg/ኪ.ግ ደረጃ ሜላሚን ይይዛሉ። Tittlemiet እና ሌሎች 23 ተመሳሳይ ጥናት አካሂደው በከፍተኛ አፈጻጸም ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ-ጅምላ ስፔክትሮሜትሪ/MS (HPLC-MS/MS) የጨቅላ ፎርሙላ (የናሙና ቁጥር፡ 72) የሜላሚን ይዘት በከፍተኛ አፈጻጸም ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ-ጅምላ ስፔክትሮሜትሪ/MS (HPLC-MS/MS) በግምት 0.0431–0.346 mg ኪ.ግ−1 እንደሆነ ወስነዋል። በቬንካታሳሚ እና ሌሎች ባደረጉት ጥናት። (2010)፣ በሕፃን ፎርሙላ እና ወተት ውስጥ ያለውን ሜላሚን ለመገመት አረንጓዴ የኬሚስትሪ አቀራረብ (አሴቶኒትሪል የሌለው) እና የተገላቢጦሽ ደረጃ ከፍተኛ አፈፃፀም ያለው ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ (RP-HPLC) ጥቅም ላይ ውለዋል። የናሙናው የማጎሪያ ክልል ከ1.0 እስከ 80 ግ/mL ሲሆን ምላሹም መስመራዊ ነበር (r > 0.999)። ዘዴው ከ5-40 ግ/mL የማጎሪያ ክልል ውስጥ 97.2–101.2 መልሶ ማግኛዎችን አሳይቷል እና የመራባት አቅሙ ከ1.0% ያነሰ አንጻራዊ መደበኛ መዛባት ነበር። በተጨማሪም፣ የታየው LOD እና LOQ በቅደም ተከተል 0.1 ግ mL−1 እና 0.2 ግ mL−124 ነበሩ። Lutter et al. (2011) በ HPLC-UV በመጠቀም በከብት ወተት እና በወተት ላይ በተመሰረተ የሕፃን ፎርሙላ ውስጥ የሜላሚን ብክለትን ለይተዋል። የሜላሚን ክምችት ከ< 0.2 እስከ 2.52 mg kg−1 ይደርሳል። የHPLC-UV ዘዴ መስመራዊ ተለዋዋጭ ክልል ለላም ወተት ከ0.05 እስከ 2.5 ሚ.ግ ኪ.ግ−1፣ የፕሮቲን ክብደት ክፍልፋይ <15% ያለው የሕፃን ቀመር ከ0.13 እስከ 6.25 ሚ.ግ ኪ.ግ−1 እና የፕሮቲን ክብደት ክፍልፋይ 15% ያለው የሕፃን ቀመር ከ0.25 እስከ 12.5 ሚ.ግ ኪ.ግ−1 ነበር። የLOD (እና LOQ) ውጤቶች ለላም ወተት 0.03 ሚ.ግ ኪ.ግ−1 (0.09 ሚ.ግ ኪ.ግ−1)፣ ለጨቅላ ፎርሙላ <15% ፕሮቲን 0.06 ሚ.ግ ኪ.ግ−1 (0.18 ሚ.ግ ኪ.ግ−1) እና ለጨቅላ ፎርሙላ 15% ፕሮቲን 0.12 ሚ.ግ ኪ.ግ−1 (0.36 ሚ.ግ ኪ.ግ−1) በቅደም ተከተል ለLOD እና LOQ የሲግናል-ወደ-ጫጫታ ጥምርታ 3 እና 1025 ነበር። Diebes et al. (2012) በጨቅላ ፎርሙላ እና በወተት ዱቄት ናሙናዎች ውስጥ የሜላሚን መጠንን HPLC/DMD በመጠቀም መርምረዋል። በጨቅላ ሕፃናት ፎርሙላ ውስጥ፣ ዝቅተኛው እና ከፍተኛው መጠን በቅደም ተከተል 9.49 ሚ.ግ. ኪ.ግ.−1 እና 258 ሚ.ግ. ኪ.ግ.−1 ነበር። የምርመራው ገደብ (LOD) 0.05 ሚ.ግ. ኪ.ግ.−1 ነበር።
ጃቫይድ እና ሌሎችም በጨቅላ ፎርሙላ ውስጥ የሚገኙት የሜላሚን ቅሪቶች በፉሪየር ትራንስፎርም ኢንፍራሬድ ስፔክትሮስኮፒ (FT-MIR) ከ0.002–2 ሚ.ግ ኪ.ግ−1 ክልል ውስጥ መሆናቸውን ሪፖርት አድርገዋል (LOD = 1 ሚ.ግ ኪ.ግ−1፤ LOQ = 3.5 ሚ.ግ ኪ.ግ−1)። ሬዛይ እና ሌሎችም 27 ሜላሚንን ለመገመት የHPLC-DDA (λ = 220 nm) ዘዴ አቅርበዋል እና በዚህ ጥናት ውስጥ ከተገኘው ደረጃ ያነሰ LOQ ለወተት ዱቄት 0.08 μg mL−1 አሳክተዋል። ሰን እና ሌሎችም በጠጣር ደረጃ ማውጣት (SPE) ፈሳሽ ወተት ውስጥ ሜላሚንን ለመለየት RP-HPLC-DAD አዘጋጅተዋል። በቅደም ተከተል 18 እና 60 μg ኪ.ግ−128 LOD እና LOQ አግኝተዋል፣ ይህም ከአሁኑ ጥናት የበለጠ ስሜታዊ ነው። ሞንቴሳኖ እና ሌሎችም። በዚህ ጥናት ውስጥ ከተጠቀሰው ዘዴ ያነሰ ስሜታዊነት ያለው የፕሮቲን ተጨማሪዎች ውስጥ የሜላሚን ይዘት ለመገምገም የ HPLC-DMD ዘዴ ውጤታማነትን አረጋግጧል29፣ ይህም ከ0.05–3 ሚ.ግ/ኪ.ግ የመጠን ገደብ ያለው ነው።
ያለምንም ጥርጥር፣ ትንታኔያዊ ላቦራቶሪዎች በተለያዩ ናሙናዎች ውስጥ ብክለትን በመከታተል አካባቢን በመጠበቅ ረገድ ትልቅ ሚና ይጫወታሉ። ሆኖም፣ በመተንተን ወቅት ከፍተኛ ቁጥር ያላቸው ሬጀንቶች እና መሟሟቶች መጠቀም አደገኛ ቅሪቶች እንዲፈጠሩ ሊያደርግ ይችላል። ስለዚህ፣ በ2000 አረንጓዴ ትንታኔ ኬሚስትሪ (GAC) በኦፕሬተሮች እና በአካባቢ ላይ የትንታኔ ሂደቶችን አሉታዊ ተፅእኖ ለመቀነስ ወይም ለማስወገድ በ2000 ተዘጋጅቷል። ሜላሚንን ለመለየት ክሮማቶግራፊ፣ ኤሌክትሮፎረሲስ፣ ካፕላሪ ኤሌክትሮፎረሲስ እና ኢንዛይም-ሊንክድ ኢሚውኖሶርበንት ምርመራ (ELISA) ያሉ ባህላዊ የሜላሚን ማወቂያ ዘዴዎች ጥቅም ላይ ውለዋል። ሆኖም፣ ከብዙ የምርመራ ዘዴዎች መካከል፣ ኤሌክትሮኬሚካል ዳሳሾች እጅግ በጣም ጥሩ ስሜታዊነት፣ መራጭነት፣ ፈጣን የትንታኔ ጊዜ እና ለተጠቃሚ ምቹ ባህሪያት ምክንያት ብዙ ትኩረትን ስበዋል30,31። አረንጓዴ ናኖቴክኖሎጂ ናኖማቴሪያሎችን ለማዋሃድ ባዮሎጂያዊ መንገዶችን ይጠቀማል፣ ይህም የአደገኛ ቆሻሻ እና የኃይል ፍጆታ መፈጠርን ሊቀንስ ይችላል፣ በዚህም ዘላቂ ልምዶችን ተግባራዊ ማድረግን ያበረታታል። ለምሳሌ፣ ከአካባቢ ተስማሚ ከሆኑ ቁሳቁሶች የተሠሩ ናኖኮምፖዚቶች፣ እንደ ሜላሚን32,33,34 ያሉ ንጥረ ነገሮችን ለመለየት በባዮሴንሰሮች ውስጥ ጥቅም ላይ ሊውሉ ይችላሉ።
ጥናቱ እንደሚያሳየው ጠንካራ-ደረጃ ማይክሮኤክስትራክሽን (SPME) ከባህላዊ የማውጣት ዘዴዎች ጋር ሲነጻጸር ከፍተኛ የኃይል ቆጣቢነት እና ዘላቂነት ስላለው ውጤታማ በሆነ መንገድ ጥቅም ላይ ይውላል። የSPME የአካባቢ ወዳጃዊነት እና የኢነርጂ ቆጣቢነት በትንታኔ ኬሚስትሪ ውስጥ ከባህላዊ የማውጣት ዘዴዎች በጣም ጥሩ አማራጭ ያደርገዋል እና ለናሙና ዝግጅት የበለጠ ዘላቂ እና ቀልጣፋ ዘዴን ይሰጣል35።
እ.ኤ.አ. በ2013፣ ዉ እና ሌሎችም በሜላሚን እና በፀረ-ሜላሚን ፀረ እንግዳ አካላት መካከል ያለውን ትስስር በመጠቀም በሕፃናት ፎርሙላ ውስጥ ሜላሚንን በፍጥነት ለመለየት የሚያስችል ከፍተኛ ስሜታዊ እና መራጭ የሆነ የፕላዝሞን ሬዞናንስ (ሚኒ-ኤስፒአር) ባዮሴንሰር ፈጥረዋል፤ ይህም በሕፃናት ፎርሙላ ውስጥ ሜላሚንን በፍጥነት ለመለየት የሚያስችል ኢሚውኖአሳይን ይጠቀማል። የSPR ባዮሴንሰር ከኢሚውኖአሳይ (ሜላሚን-የተያያዘ የበሬ ሥጋ ሴረም አልቡሚንን በመጠቀም) ጋር ተጣምሮ ለመጠቀም ቀላል እና ዝቅተኛ ዋጋ ያለው ቴክኖሎጂ ሲሆን የመለየት ገደብ 0.02 μg mL-136 ብቻ ነው።
ናሲሪ እና አባሲያን በንግድ ናሙናዎች ውስጥ ሜላሚንን ለመለየት ከግራፊን ኦክሳይድ-ቺቶሳን ውህዶች (GOCS) ጋር በማጣመር ከፍተኛ አቅም ያለው ተንቀሳቃሽ ዳሳሽ ተጠቅመዋል37። ይህ ዘዴ እጅግ በጣም ከፍተኛ ምርጫ፣ ትክክለኛነት እና ምላሽ አሳይቷል። የGOCS ዳሳሹ አስደናቂ ስሜታዊነት (239.1 μM−1)፣ ከ0.01 እስከ 200 μM የሚደርስ መስመራዊ ክልል፣ 1.73 × 104 የሆነ የአፊኒቲ ቋሚ እና እስከ 10 nM የሚደርስ LOD አሳይቷል። ከዚህም በላይ በቻንድራሴካር እና ሌሎች በ2024 የተካሄደ ጥናት ለአካባቢ ተስማሚ እና ወጪ ቆጣቢ አቀራረብን ተቀብሏል። ለአካባቢ ተስማሚ በሆነ ዘዴ የዚንክ ኦክሳይድ ናኖፓርቲክሎችን (ZnO-NPs) ለማዋሃድ የፓፓያ ልጣጭ ማውጣትን እንደ ቅነሳ ወኪል ተጠቅመዋል። በመቀጠልም፣ በሕፃን ቀመር ውስጥ ሜላሚንን ለመወሰን ልዩ የሆነ ማይክሮ-ራማን ስፔክትሮስኮፒ ቴክኒክ ተዘጋጅቷል። ከግብርና ቆሻሻ የተገኙ ZnO-NPs እንደ ጠቃሚ የምርመራ መሳሪያ እና ሜላሚንን ለመቆጣጠር እና ለመለየት አስተማማኝ፣ ዝቅተኛ ዋጋ ያለው ቴክኖሎጂ እምቅ አቅም አሳይተዋል።
አሊዛዴህ እና ሌሎች (2024) በወተት ዱቄት ውስጥ ሜላሚንን ለመወሰን በጣም ስሜታዊ የሆነ የብረት-ኦርጋኒክ ማዕቀፍ (MOF) የፍሎረሰንስ መድረክን ተጠቅመዋል። በ3σ/S በመጠቀም የሚወሰነው የዳሳሹ መስመራዊ ክልል እና ዝቅተኛ የመለየት ገደብ በቅደም ተከተል ከ40 እስከ 396.45 nM (ከ25 μg ኪ.ግ.−1 እስከ 0.25 mg ኪ.ግ.−1 ጋር እኩል ነው) እና 40 nM (ከ25 μg ኪ.ግ.−1 ጋር እኩል ነው)። ይህ ክልል በሕፃን ቀመር (1 mg ኪ.ግ.−1) እና በሌሎች የምግብ/ምግብ ናሙናዎች (2.5 mg ኪ.ግ.−1) ውስጥ ሜላሚንን ለመለየት ከተቀመጡት ከፍተኛ የተረፈ መጠን (MRLs) በጣም ያነሰ ነው። የፍሎረሰንት ዳሳሽ (terbium (Tb)@NH2-MIL-253(Al)MOF) በወተት ዱቄት ውስጥ ሜላሚንን በመለየት ረገድ ከHPLC39 የበለጠ ትክክለኛነት እና የበለጠ ትክክለኛ የመለኪያ ችሎታ አሳይቷል። በአረንጓዴ ኬሚስትሪ ውስጥ ያሉ ባዮሴንሰሮች እና ናኖኮምፖዚቶች የመለየት ችሎታዎችን ከማሻሻል ባለፈ ከዘላቂ የልማት መርሆዎች ጋር በሚስማማ መልኩ የአካባቢ አደጋዎችን ይቀንሳሉ።
ሜላሚንን ለመወሰን በተለያዩ ዘዴዎች ላይ የአረንጓዴ ኬሚስትሪ መርሆዎች ተግባራዊ ሆነዋል። አንዱ አቀራረብ እንደ የሕፃን ቀመር እና ሙቅ ውሃ ካሉ ናሙናዎች ሜላሚን 40ን በብቃት ለማውጣት ከሲትሪክ አሲድ ጋር ተፈጥሯዊ የፖላር ፖሊመር ቤታ-ሳይክሎዴክስትሪን በመጠቀም አረንጓዴ የሚበታተን ጠንካራ-ደረጃ ማይክሮኤክስትራክሽን ዘዴ ማዘጋጀት ነው። ሌላኛው ዘዴ በወተት ናሙናዎች ውስጥ ሜላሚንን ለመወሰን የማኒች ምላሽን ይጠቀማል። ይህ ዘዴ ርካሽ፣ ለአካባቢ ተስማሚ እና ከ0.1-2.5 ppm መስመራዊ ክልል እና ዝቅተኛ የመለየት ገደብ ያለው 41 ነው። በተጨማሪም፣ በፈሳሽ ወተት እና በሕፃን ቀመር ውስጥ ሜላሚንን ለመለካት ወጪ ቆጣቢ እና ለአካባቢ ተስማሚ የሆነ ዘዴ የተዘጋጀው ከፍተኛ ትክክለኛነት እና በቅደም ተከተል 1 ppm እና 3.5 ppm የመለየት ገደቦች ያሉት የፉሪየር ትራንስፎርም ኢንፍራሬድ ማስተላለፊያ ስፔክትሮስኮፒ በመጠቀም ነው። እነዚህ ዘዴዎች ሜላሚንን ለመወሰን ቀልጣፋ እና ዘላቂ ዘዴዎችን ለማዘጋጀት የአረንጓዴ ኬሚስትሪ መርሆዎችን ተግባራዊነት ያሳያሉ።
በርካታ ጥናቶች እንደ ጠንካራ-ደረጃ ማውጣት እና ከፍተኛ-አፈፃፀም ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ (HPLC)43 መጠቀም ያሉ የሜላሚን ለይቶ ማወቅን የመሳሰሉ አዳዲስ ዘዴዎችን አቅርበዋል፣ እንዲሁም ውስብስብ ቅድመ-ህክምና ወይም የአዮን-ጥንዶችን ሬጀንቶች የማይፈልግ ፈጣን ከፍተኛ-አፈፃፀም ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ (HPLC)፣ በዚህም የኬሚካል ብክነትን መጠን ይቀንሳል44። እነዚህ ዘዴዎች በወተት ተዋጽኦዎች ውስጥ ሜላሚንን ለመወሰን ትክክለኛ ውጤቶችን ብቻ ሳይሆን የአረንጓዴ ኬሚስትሪ መርሆዎችን ያከብራሉ፣ አደገኛ ኬሚካሎችን መጠቀምን ይቀንሳሉ እና የትንታኔ ሂደቱ አጠቃላይ የአካባቢ ተጽዕኖን ይቀንሳሉ።
አርባ የተለያዩ የምርት ስሞች ናሙናዎች በሦስት እጥፍ ተፈትነዋል፣ ውጤቶቹም በሰንጠረዥ 2 ላይ ቀርበዋል። በሕፃን ፎርሙላ እና በወተት ዱቄት ናሙናዎች ውስጥ ያለው የሜላሚን መጠን በቅደም ተከተል ከ0.001 እስከ 0.004 mg/kg እና ከ0.001 እስከ 0.095 mg/kg ይደርሳል። በሕፃናት ፎርሙላ በሦስት የዕድሜ ቡድኖች መካከል ምንም ጉልህ ለውጦች አልታዩም። በተጨማሪም፣ ሜላሚን በ80% የወተት ዱቄት ውስጥ ተገኝቷል፣ ነገር ግን 65% የሚሆኑት የሕፃናት ፎርሙላዎች በሜላሚን ተበክለዋል።
በኢንዱስትሪ የወተት ዱቄት ውስጥ ያለው የሜላሚን ይዘት ከሕፃን ፎርሙላ የበለጠ ነበር፣ እና ልዩነቱ ጉልህ ነበር (p<0.05) (ምስል 2)።
የተገኙት ውጤቶች በኤፍዲኤ (FDA) ከተቀመጡት ገደቦች በታች (ከ1 እና 2.5 ሚ.ግ/ኪ.ግ በታች) ነበሩ። በተጨማሪም፣ ውጤቶቹ በCAC (2010) እና EU45,46 ከተቀመጡት ገደቦች ጋር የሚጣጣሙ ናቸው፣ ማለትም ከፍተኛው የሚፈቀደው ገደብ ለህፃናት ፎርሙላ 1 ሚ.ግ-1 ኪ.ግ-1 እና ለወተት ተዋጽኦዎች 2.5 ሚ.ግ-1 ኪ.ግ-1 ነው።
በ2023 በጋናቲ እና ሌሎች 47 ባደረጉት ጥናት መሠረት፣ በኢራን ውስጥ በተለያዩ የታሸጉ የወተት ዓይነቶች ውስጥ ያለው የሜላሚን ይዘት ከ50.7 እስከ 790 μg ኪ.ግ−1 ይደርሳል። ውጤቶቻቸው ከኤፍዲኤ ከሚፈቀደው ገደብ በታች ነበሩ። ውጤቶቻችን ከሾደር እና ሌሎች 48 እና ሪማ እና ሌሎች 49 ያነሱ ናቸው። ሾደር እና ሌሎች (2010) በወተት ዱቄት (n=49) ውስጥ ያለው የሜላሚን መጠን ከ0.5 እስከ 5.5 mg/ኪ.ግ እንደሚደርስ ደርሰውበታል። ሪማ እና ሌሎችም በወተት ዱቄት ውስጥ ያለውን የሜላሚን ቅሪቶች በፍሎረሰንስ ስፔክትሮፎሜትሪ ተንትነዋል እና በወተት ዱቄት ውስጥ ያለው የሜላሚን ይዘት ከ0.72–5.76 mg/ኪ.ግ መሆኑን አረጋግጠዋል። በካናዳ በ2011 በፈሳሽ ክሮማቶግራፊ (LC/MS) በመጠቀም በሕፃን ፎርሙላ (n=94) ውስጥ ያለውን የሜላሚን መጠን ለመከታተል ጥናት ተካሂዷል። የሜላሚን ክምችት ከሚፈቀደው ገደብ በታች እንደሆነ ተገኝቷል (የመጀመሪያ ደረጃ፡ 0.5 mg kg−1)። የተገኘው የተጭበረበረ የሜላሚን መጠን የፕሮቲን ይዘትን ለመጨመር የሚያገለግል ዘዴ ነው ብሎ ማሰብ የማይመስል ነገር ነው። ሆኖም ግን፣ በማዳበሪያ አጠቃቀም፣ የእቃ መያዣውን ይዘት በማዛወር ወይም ተመሳሳይ በሆኑ ምክንያቶች ሊብራራ አይችልም። በተጨማሪም፣ ወደ ካናዳ በሚመጣው የወተት ዱቄት ውስጥ የሚገኘው የሜላሚን ምንጭ አልተገለጸም50።
ሃሳኒ እና ሌሎችም በ2013 በኢራን ገበያ ውስጥ በወተት ዱቄት እና በፈሳሽ ወተት ውስጥ ያለውን የሜላሚን ይዘት ለክተው ተመሳሳይ ውጤቶችን አግኝተዋል። ውጤቶቹ እንደሚያሳዩት ከአንድ የወተት ዱቄት እና ፈሳሽ ወተት ምርት በስተቀር ሌሎች ሁሉም ናሙናዎች በሜላሚን የተበከሉ ሲሆኑ፣ መጠኑ በወተት ዱቄት ውስጥ ከ1.50 እስከ 30.32 μg g−1 እና በወተት ውስጥ ከ0.11 እስከ 1.48 μg ml−1 ይደርሳል። በተለይም፣ ሲያኑሪክ አሲድ በማንኛውም ናሙናዎች ውስጥ አልተገኘም፣ ይህም ለሸማቾች የሜላሚን መመረዝ እድልን ቀንሷል። 51 ቀደም ሲል የተደረጉ ጥናቶች የወተት ዱቄት በያዙ የቸኮሌት ምርቶች ውስጥ ያለውን የሜላሚን ክምችት ገምግመዋል። ወደ 94% የሚሆኑት ከውጭ የሚመጡ ናሙናዎች እና 77% የሚሆኑት የኢራን ናሙናዎች ሜላሚን ይይዛሉ። ከውጭ የሚመጡ ናሙናዎች ውስጥ የሜላሚን መጠን ከ0.032 እስከ 2.692 mg/kg ሲሆን በኢራን ናሙናዎች ውስጥ ያሉት ደግሞ ከ0.013 እስከ 2.600 mg/kg ይደርሳሉ። በአጠቃላይ፣ ሜላሚን በ85% ናሙናዎች ውስጥ ተገኝቷል፣ ነገር ግን አንድ የተወሰነ የምርት ስም ብቻ ከሚፈቀደው ገደብ በላይ ደረጃዎች አሉት።44 ቲትልሚየር እና ሌሎች በወተት ዱቄት ውስጥ የሜላሚን መጠን ከ0.00528 እስከ 0.0122 mg/kg ድረስ ሪፖርት አድርገዋል።
ሠንጠረዥ 3 ለሶስቱ የዕድሜ ቡድኖች የአደጋ ግምገማ ውጤቶችን ያጠቃልላል። በሁሉም የዕድሜ ክልሎች ውስጥ ያለው አደጋ ከ 1 ያነሰ ነበር። ስለዚህ፣ በሕፃን ፎርሙላ ውስጥ ከሜላሚን የሚመጣ የካንሰር ያልሆነ የጤና አደጋ የለም።
በወተት ተዋጽኦዎች ውስጥ የሚኖረው ዝቅተኛ የብክለት መጠን በዝግጅት ወቅት ባለማወቅ በሚፈጠር ብክለት ምክንያት ሊሆን ይችላል፣ ከፍተኛ መጠን ያለው ደግሞ ሆን ተብሎ በሚጨመርበት ምክንያት ሊሆን ይችላል። በተጨማሪም፣ ዝቅተኛ የሜላሚን መጠን ያላቸውን የወተት ተዋጽኦዎች ከመመገብ የሚመጣው አጠቃላይ የሰው ልጅ ጤና አደጋ ዝቅተኛ እንደሆነ ይቆጠራል። እንዲህ ያሉ ዝቅተኛ የሜላሚን መጠን የያዙ ምርቶችን መመገብ ለሸማቾች ጤና ምንም አይነት አደጋ እንደማያስከትል መደምደም ይቻላል52።
በወተት ኢንዱስትሪ ውስጥ በተለይም የህዝብ ጤናን በመጠበቅ ረገድ የምግብ ደህንነት አስተዳደር አስፈላጊነትን ከግምት ውስጥ በማስገባት፣ በወተት ዱቄት እና በሕፃን ፎርሙላ ውስጥ የሜላሚን ደረጃዎችን እና ቅሪቶችን ለመገምገም እና ለማነፃፀር ዘዴ ማዘጋጀት እና ማረጋገጥ እጅግ በጣም አስፈላጊ ነው። በሕፃን ፎርሙላ እና በወተት ዱቄት ውስጥ ሜላሚንን ለመወሰን ቀላል እና ትክክለኛ የ HPLC-UV spectrophotometric ዘዴ ተዘጋጅቷል። ዘዴው አስተማማኝነቱን እና ትክክለኛነቱን ለማረጋገጥ ተረጋግጧል። የዘዴው የመለየት እና የመጠን ገደቦች በሕፃን ፎርሙላ እና በወተት ዱቄት ውስጥ የሜላሚን መጠን ለመለካት በቂ ስሜታዊ እንደሆኑ ታይቷል። በእኛ መረጃ መሠረት፣ ሜላሚን በአብዛኛዎቹ የኢራን ናሙናዎች ውስጥ ተገኝቷል። የተገኙት ሁሉም የሜላሚን ደረጃዎች በ CAC ከተቀመጡት ከፍተኛ የሚፈቀዱ ገደቦች በታች ነበሩ፣ ይህም የእነዚህ አይነት የወተት ተዋጽኦዎች ፍጆታ ለሰው ልጅ ጤና አደጋ እንደማያስከትል ያሳያል።
ጥቅም ላይ የዋሉት ሁሉም የኬሚካል ሪጀንቶች የትንታኔ ደረጃ ያላቸው ነበሩ፤ ሜላሚን (2,4,6-ትሪአሚኖ-1,3,5-ትሪአዚን) 99% ንፁህ (ሲግማ-አልድሪች፣ ሴንት ሉዊስ፣ ኤምኦ)፤ የHPLC-ደረጃ አሴቶኒትሪል (ሜርክ፣ ዳርምስታድት፣ ጀርመን)፤ እጅግ በጣም ንጹህ ውሃ (ሚሊፖሬ፣ ሞርፍሃይም፣ ፈረንሳይ)። የሚጣሉ የሲሪንጅ ማጣሪያዎች (ክሮማፊል ኤክስትራ PVDF-45/25፣ የቀዳዳ መጠን 0.45 μm፣ የሜምብሬን ዲያሜትር 25 ሚሜ) (ማቼሬይ-ናጄል፣ ዱረን፣ ጀርመን)።
ናሙናዎቹን ለማዘጋጀት የአልትራሳውንድ መታጠቢያ (ኤልማ፣ ጀርመን)፣ ሴንትሪፉጅ (ቤክማን ኮልተር፣ ክሬፌልድ፣ ጀርመን) እና HPLC (KNAUER፣ ጀርመን) ጥቅም ላይ ውለዋል።
ከፍተኛ አፈጻጸም ያለው ፈሳሽ ክሮማቶግራፍ (KNAUER፣ ጀርመን) በ UV መመርመሪያ የተገጠመለት ጥቅም ላይ ውሏል። የHPLC ትንተና ሁኔታዎች እንደሚከተለው ነበሩ፡- ODS-3 C18 ትንታኔያዊ አምድ (4.6 ሚሜ × 250 ሚሜ፣ የቅንጣት መጠን 5 μm) (MZ፣ ጀርመን) የተገጠመለት የUHPLC Ultimate ስርዓት ጥቅም ላይ ውሏል። የHPLC eluent (ሞባይል ደረጃ) የ1 mL ደቂቃ-1 የፍሰት ፍጥነት ያለው የTFA/methanol ድብልቅ (450:50 mL) ነበር። የመለየት የሞገድ ርዝመት 242 nm ነበር። የመርፌው መጠን 100 μL ነበር፣ የአምድ የሙቀት መጠኑ 20 °C ነበር። የመድኃኒቱ የማቆያ ጊዜ ረጅም ስለሆነ (15 ደቂቃዎች)፣ የሚቀጥለው መርፌ ከ25 ደቂቃዎች በኋላ መደረግ አለበት። ሜላሚን የማቆያ ጊዜውን እና የሜላሚን ደረጃዎችን የአልትራቫዮሌት ስፔክትረም ጫፍ በማነፃፀር ተለይቷል።
መደበኛ የሜላሚን (10 μg/mL) መፍትሄ በውሃ ተዘጋጅቶ ከብርሃን ርቆ በማቀዝቀዣ (4°ሴ) ውስጥ ተከማችቷል። የአክሲዮን መፍትሄውን በተንቀሳቃሽ ደረጃ ይቀልጡት እና የሚሰሩ መደበኛ መፍትሄዎችን ያዘጋጁ። እያንዳንዱ መደበኛ መፍትሄ በHPLC ውስጥ 7 ጊዜ ተሰጥቷል። የካሊብሬሽን እኩልታ 10 የተሰላው በተወሰነው የጫፍ ቦታ እና በተወሰነው ክምችት ላይ ባለው የሪግሬሽን ትንተና ነው።
ለንግድ የሚውሉ የላም ወተት ዱቄት (20 ናሙናዎች) እና የተለያዩ የላም ወተት ላይ የተመሰረተ የሕፃን ፎርሙላ ናሙናዎች (20 ናሙናዎች) በኢራን ውስጥ ካሉ የአካባቢ ሱፐርማርኬቶች እና ፋርማሲዎች የተገዙ ሲሆን የተለያዩ የዕድሜ ክልሎችን (0-6 ወር፣ 6-12 ወር እና ከ12 ወር በላይ) ላሉ ህጻናት ለመመገብ እና እስኪተነተን ድረስ በማቀዝቀዣ ውስጥ (4°ሴ) ውስጥ ተከማችተዋል። ከዚያም 1 ± 0.01 ግራም ተመሳሳይነት ያለው የወተት ዱቄት ተመዝኖ ከአሴቶኒትሪል:ውሃ (50:50፣ v/v፤ 5 ሚሊ ሊትር) ጋር ተቀላቅሏል። ድብልቁ ለ1 ደቂቃ ተቀላቅሎ ከዚያም በአልትራሳውንድ መታጠቢያ ውስጥ ለ30 ደቂቃ ተጨምሮ በመጨረሻም ለ1 ደቂቃ ተናወጠ። ድብልቁ ከዚያም በክፍል ሙቀት ውስጥ በ9000 × g ለ10 ደቂቃ በሴንትሪፉጅ ተደርገ እና የላይኛው ክፍል በ0.45 μm የሲሪንጅ ማጣሪያ በመጠቀም በ2 ሚሊ ሊትር አውቶሳምፕለር ብልቃጥ ውስጥ ተጣርቶ ተወስዷል። ከዚያም የማጣሪያው (250 μl) ከውሃ (750 μl) ጋር ተቀላቅሎ በHPLC ሲስተም10,42 ላይ ተጨምሯል።
ዘዴውን ለማረጋገጥ፣ በተመቻቸ ሁኔታ ውስጥ መልሶ ማግኛ፣ ትክክለኛነት፣ የመለየት ገደብ (LOD)፣ የመጠን ገደብ (LOQ) እና ትክክለኛነትን ወስነናል። LOD የተገለጸው ከመነሻ ጫጫታ ደረጃ ሶስት እጥፍ ከፍ ያለ ከፍታ ያለው የናሙና ይዘት ነው። በሌላ በኩል፣ የምልክት-ወደ-ጫጫታ ጥምርታ 10 እጥፍ ከፍ ያለ ከፍታ ያለው የናሙና ይዘት LOQ ተብሎ ተገልጿል።
የመሳሪያው ምላሽ ሰባት የውሂብ ነጥቦችን ባካተተ የካሊብሬሽን ኩርባ በመጠቀም ተወስኗል። የተለያዩ የሜላሚን ይዘቶች ጥቅም ላይ ውለዋል (0፣ 0.2፣ 0.3፣ 0.5፣ 0.8፣ 1 እና 1.2)። የሜላሚን ስሌት ሂደት መስመራዊነት ተወስኗል። በተጨማሪም፣ በርካታ የተለያዩ የሜላሚን ደረጃዎች ወደ ባዶ ናሙናዎች ተጨምረዋል። ​​የካሊብሬሽን ኩርባ የተገነባው 0.1–1.2 μg mL−1 መደበኛ የሜላሚን መፍትሄን ወደ ህፃናት ፎርሙላ እና የዱቄት ወተት ናሙናዎች እና R2 = 0.9925 በመርፌ በመወጋት ነው። ትክክለኝነት የተገመገመው በሂደቱ ድግግሞሽ እና እንደገና ሊባዛ የሚችልነት ሲሆን በመጀመሪያዎቹ እና በሚቀጥሉት ሶስት ቀናት ናሙናዎችን በመርፌ በመወጋት ነው (በሶስት እጥፍ)። የዘዴው ተደጋጋሚነት የተገመገመው ለሶስት የተለያዩ የተጨመረ ሜላሚን ክምችት የ RSD % በማስላት ነው። ትክክለኛነትን ለመወሰን የማገገሚያ ጥናቶች ተካሂደዋል። በማውጣት ዘዴው የማገገሚያ ደረጃ በሕፃናት ፎርሙላ እና በደረቅ ወተት ናሙናዎች ላይ በሦስት የሜላሚን ክምችት (0.1፣ 1.2፣ 2) ደረጃ ተሰልቷል።
ግምታዊ የዕለት መጠን (EDI) የሚወሰነው የሚከተለውን ቀመር በመጠቀም ነው፡ EDI = Ci × Cc/BW።
ሲ አማካይ የሜላሚን ይዘት ሲሆን፣ ሲሲ የወተት ፍጆታ ሲሆን ቢደብሊው ደግሞ የልጆች አማካይ ክብደት ነው።
የውሂብ ትንተና የተካሄደው SPSS 24ን በመጠቀም ነው። መደበኛነት የተፈተነው በኮልሞጎሮቭ-ስሚርኖቭ ሙከራ ነው፤ ሁሉም መረጃዎች ፓራሜትሪክ ያልሆኑ ሙከራዎች ነበሩ (p = 0)። ስለዚህ፣ የክሩስካል-ዋሊስ ሙከራ እና የማን-ዊትኒ ሙከራ በቡድኖች መካከል ጉልህ ልዩነቶችን ለመወሰን ጥቅም ላይ ውለዋል።
ኢንግልፊንገር፣ ጁኒየር። ሜላሚን እና በዓለም አቀፍ የምግብ ብክለት ላይ ያለው ተጽእኖ። የኒው ኢንግላንድ የሕክምና ጆርናል 359(26)፣ 2745–2748 (2008)።
ሊንች፣ አርኤ፣ እና ሌሎችም። የፒኤች መጠን በልጆች ጎድጓዳ ሳህኖች ውስጥ በሜላሚን ፍልሰት ላይ የሚያሳድረው ተጽዕኖ። ዓለም አቀፍ የምግብ ብክለት ጆርናል፣ 2፣ 1–8 (2015)።
ባሬት፣ ኤምፒ እና ጊልበርት፣ አይኤች መርዛማ ውህዶችን ወደ ትራይፓኖሶሞች ውስጠኛ ክፍል ኢላማ ማድረግ። በፓራሳይቶሎጂ ውስጥ እድገት 63፣ 125–183 (2006)።
ኒርማን፣ ኤምኤፍ፣ እና ሌሎችም። ሜላሚን ዴንድሪመሮችን እንደ መድኃኒት አቅርቦት ተሽከርካሪዎች በብልቃጥ እና በቪቮ ግምገማ። ዓለም አቀፍ የፋርማሲ ጆርናል፣ 281(1–2)፣ 129–132(2004)።
የዓለም የጤና ድርጅት። የሜላሚን እና የሲያኑሪክ አሲድ መርዛማ ገጽታዎችን ለመገምገም የባለሙያ ስብሰባዎች 1-4 (2008)።
ሆው፣ ኤኬ-ሲ.፣ ክዋን፣ ቲኤች እና ሊ፣ ፒኬ-ቲ። የሜላሚን መርዛማነት እና ኩላሊት። የአሜሪካ የኔፍሮሎጂ ማህበር ጆርናል 20(2)፣ 245–250 (2009)።
ኦዝቱርክ፣ ኤስ. እና ዴሚር፣ ኤን. ከፍተኛ አፈጻጸም ባለው ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ (HPLC) አማካኝነት በወተት ተዋጽኦዎች ውስጥ ሜላሚንን ለመለየት የሚያስችል አዲስ የIMAC adsorbent ልማት። የምግብ ውህደት እና ትንተና ጆርናል 100፣ 103931 (2021)።
ቻንሱቫርን፣ ቪ.፣ ፓኒክ፣ ኤስ. እና ኢሚም፣ ኤ. በማኒች አረንጓዴ ምላሽ ላይ የተመሠረተ የሜላሚን ፈሳሽ ወተት ውስጥ ቀላል የስፔክትሮፎቶሜትሪክ ውሳኔ። Spectrochem። Acta Part A Mol. Biomol. Spectrosc. 113፣ 154–158 (2013)።
ዴብስ፣ ኤም. እና ኤል-ሃቢብ፣ አር. በኤች.ሲ.ኤል.ሲ./ዳይኦድ አሪየር ክሮማቶግራፊ አማካኝነት በሕፃን ፎርሙላ፣ በወተት ዱቄት እና በፓንጋሲየስ ናሙናዎች ውስጥ የሜላሚን መጠን መወሰን። የአካባቢ ትንተና ቶክሲኮሎጂ ጆርናል፣ 2(137)፣ 2161–0525.1000137 (2012)።
ስኪነር፣ ኬጂ፣ ቶማስ፣ ጄዲ እና ኦስተርሎህ፣ ጄዲ የሜላሚን መርዛማነት። የህክምና ቶክሲኮሎጂ ጆርናል፣ 6፣ 50–55 (2010)።
የዓለም የጤና ድርጅት (WHO)፣ የሜላሚን እና የሲያኑሪክ አሲድ መርዛማነት እና የጤና ገጽታዎች፡ በጤና ካናዳ፣ ኦታዋ፣ ካናዳ የተደገፈ የዓለም ጤና ድርጅት/የFAO የትብብር ባለሙያዎች ስብሰባ ሪፖርት፣ ታህሳስ 1-4፣ 2008 (2009)።
ኮርማ፣ ኤስኤ፣ እና ሌሎችም። አዲስ ተግባራዊ መዋቅራዊ ቅባቶችን እና የንግድ የሕፃናት ቀመርን የያዘ የሕፃን ፎርሙላ ዱቄት የሊፒድ ስብጥር እና ጥራት ንፅፅር ጥናት። የአውሮፓ የምግብ ምርምር እና ቴክኖሎጂ 246፣ 2569–2586 (2020)።
ኤል-ዋሲፍ፣ ኤም. እና ሃሼም፣ ኤች. የዘንባባ ዘይትን በመጠቀም የሕፃናት ቀመር የአመጋገብ ዋጋ፣ የጥራት ባህሪያት እና የመደርደሪያ ሕይወት ማሻሻል። የመካከለኛው ምስራቅ የግብርና ምርምር ጆርናል 6፣ 274–281 (2017)።
ዪን፣ ደብሊው.፣ እና ሌሎችም። በሜላሚን ላይ የሚደረጉ ሞኖክሎናል ፀረ እንግዳ አካላትን ማምረት እና በጥሬ ወተት፣ በደረቅ ወተት እና በእንስሳት መኖ ውስጥ ሜላሚንን ለመለየት ቀጥተኛ ያልሆነ ተወዳዳሪ የELISA ዘዴ ማዘጋጀት። የግብርና እና የምግብ ኬሚስትሪ ጆርናል 58(14)፣ 8152–8157 (2010)።